IBD的發病機制尚未完全闡明，建立合適的IBD動物模型對研究IBD的發病

機制及其治療措施具有重要意義。經典的造模方法有：自發模型、遺傳模型、過繼轉移模型和誘導模型。這些模型都有其自身的缺點，例如操作步驟復雜、動物死亡率高、發病機制與人發病機制相差較遠等。

葡聚糖硫酸鈉（DSS），是一種具有抗凝血特性的化學大腸桿菌素，能夠刺激大腸上皮單層襯里受損，導致促炎性腸道內容物（如細菌及其產物）擴散到底層組織，引起結腸組織炎癥發生。DSS結腸炎模型快速、簡單、重復性和可控性高，是誘導急性、慢性和復發性腸道炎癥模型的常用造模手段。

DSS誘導結腸炎的機制與臨床結腸炎發病機制非常相近，是研究結腸炎發病機制的理想模型。通過不同濃度DSS反復交替作用誘導結腸炎模型，可以通過控制藥物濃度和給藥次數，能夠有效減輕結腸損傷程度，降低該疾病模型的動物死亡率。

DSS能夠成功誘導小鼠慢性結腸炎實驗動物模型, 其操作簡單, 結果穩定可靠，不可遺傳，是一種安全有效的結腸炎造模方法。在實際運用中, 更為推薦1%，2%濃度交替作用誘導炎癥發生。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 選擇40 只健康雌性BALB/cJRj小鼠，體質量20-25 g，5只/盒分配于SPF 級屏障系統中，溫度 (22±2) ℃，濕度50% ～ 60%，12 h 循環照明，小鼠自由攝取食、水。

1.2儀器與試劑 糞便隱血檢測試劑盒； EG1160石蠟包埋機( LEICA)。

2 方法

2.1 動物模型制備 用無菌水分別配置1%和2%的葡聚糖硫酸鈉（DSS）（wt/vol）。先給予動物2％DSS劑量飲水5天，再給予1％DSS 劑量飲水10天，再給予2％DSS劑量飲水 7天。每天稱量小鼠體重和消耗的DSS量并記錄。每三天檢測一次小鼠糞便稠度改變和糞便出血跡象。根據小鼠體重減輕、大便黏稠度、腹瀉和大便出血的綜合得分計算疾病活動指數（DAI），用以評估結腸炎的臨床進展。

2.2 標本采集及處理 在實驗結束后，稱取小鼠體質量，用1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，仰臥位置于動物實驗臺上，固定四肢，暴漏胸腹部，經下腔靜脈采血。全血室溫靜置30 min后，3,000 rpm，4°C離心15 min，分離血漿，測定髓過氧化物酶（MPO）水平。解剖小鼠腹腔，取結腸組織，濾紙吸干后稱重，并測量結腸長度，取近端、中端或遠端各一段結腸進行石蠟包埋。其余結腸組織分裝于1.5 mL 離心管中，-80℃低溫保存。

一、疾病概述

炎癥性腸病（IBD）是一種病因不明、異常免疫介導的慢性腸道炎癥性疾病，它反復發作，甚至可以伴隨患者終生，包括克羅恩病以及潰瘍性結腸炎兩種疾病。在臨床上，IBD患者主要表現為反復的腹痛、腹瀉、黏液血便，甚至出現各種全身并發癥如視物模糊、關節疼痛、皮疹等。IBD也會增加腸道受累部位癌變的風險。隨著生活方式的改變，我國已經成為IBD發病率最高的亞洲國家。目前，IBD治療藥物主要以降低炎癥、提高患者的生活質量為主，但是這些藥物的副作用很大，且不能夠長期用于維持治療。動物模型可以很好的模擬臨床發病過程以及病理生理改變，為探究IBD的發病機制和治療手段提供研究基礎。目前已經開發出多種IBD動物模型，主要包括自發模型、遺傳模型、過繼轉移模型和誘導模型。其中DSS誘導的急性和慢性結腸炎模型是IBD研究中應用最廣泛的兩種誘導型動物模型。

二、模型背景

1、造模因素信息

葡聚糖硫酸鈉誘導

2、實驗動物背景信息

8-12周齡的雌性BALB/cJRj小鼠，體重20-25g

3、研究背景

炎癥性腸病（IBD）是腸道的慢性緩解性炎癥性疾病[1]，包括克羅恩病和潰瘍性結腸炎兩種疾病。其臨床癥狀主要包括腹部痙攣、血性腹瀉和體重減輕，并伴隨有多種腸外癥狀[2]。目前IBD的病因尚不清楚，為了研究IBD的發病機制，現在已經開發出多種結腸炎的動物模型，模型范圍從某些物種的易感菌株自發產生的模型到施用特定濃度的誘導化學品的模型[3]。這些模型是不可或缺的工具，可以用于探究IBD的潛在發病機制以及評估藥物的治療效果。在各種化學誘導的結腸炎模型中，由于葡聚糖硫酸鈉鈉（DSS）誘導的結腸炎模型操作簡單，并且與臨床結腸炎有許多相似支，因此該模型是IBD最常用和最好描述的模型[3]。

葡聚糖硫酸鈉（DSS），是一種帶負電的水溶性硫酸多糖，分子量高度可變，范圍為5-1400 kDa[4]。作為一種具有抗凝血特性的化學大腸桿菌素，DSS誘導腸道炎癥的機制是由于大腸上皮單層襯里受損，導致促炎性腸道內容物（如細菌及其產物）擴散到底層組織，導致腸道組織病理性改變[5]。DSS結腸炎模型制作方式簡單、誘導周期短、具有良好的模型重復性和可控性，因此在IBD研究中非常流行。通過改變DSS的給藥濃度和給藥頻率，可以建立急性、慢性和復發性腸道炎癥模型。

為了開發針對腸道炎癥模型治療的新靶點藥物，根據不同濃度DSS給藥方案，在飲用水中施用DSS會產生慢性或急性結腸炎。我們通過控制DSS藥物誘導濃度和給藥次數，改善了結腸損傷程度,有效降低了該疾病模型的動物死亡率。

[1]Podolsky DK. Inflammatory bowel disease.N Engl J Med.2002; 347: 417–429.

[2] Sands, B.E. From symptom to diagnosis: clinical distinctions among various forms of intestinal inflammation.Gastroenterology.126.

[3]Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., & Neurath, M.F . Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.Nat. Protoc.2, 541-546(2007).

[4] Steele CW, Karim SA, Foth M, et al. CXCR2 inhibition suppresses acute and chronic pancreatic inflammation. J Pathol. 2015 Sep;237(1):85-97.

[5] Laroui, H., Ingersoll, S.A., Liu, H.C., Baker, M.T.,Ayyadurai, S., Charania, M.A., Laroui, F., Y an,Y ., Sitaraman, S.V ., and Merlin, D. 2012. Dextran sodium sulfate (DSS) induces colitis in miceby forming nano-lipocomplexes with medium-chain-

length fatty acids in the colon.PLoS ONE.7:e32084