該模型在輻射導致的腸損傷機制研究及防治研究應(yīng)用比較廣泛。不同品系的小鼠進行腸道細胞輻射敏感性具有差異。在應(yīng)用時續(xù)作充分考慮。

制備動物模型使用的小動物照射設(shè)備自身帶有防護設(shè)施，使用安全。

1. 30天生存率 照射后 7 天, 對照組、照射組小鼠的存活率分別為100.0%、60.0%(P<0.05)。對照組的30 天生存率為100%, 照射組第11 天全部死亡。照射組死亡小鼠的平均生存天數(shù)分別為7.5天。

2. 全身照射小鼠小腸隱窩細胞凋亡的影響 小腸隱窩HE 染色和caspase-3 染色的結(jié)果圖2。在小腸隱窩HE 染色結(jié)果中, 照射組的每個隱窩平均凋亡細胞數(shù)量（1.98 ± 0.25）比對照組（0.14 ± 0.02 ）升高 (P < 0.001)。在小腸隱窩caspase-3免疫組化染色結(jié)果中, 對照組的陽性細胞較少（0.01 ± 0.01），照射組的每個隱窩平均凋亡細胞數(shù)量（0.51 ± 0.07）比對照組明顯升高(P<0.001)。

3.全身照射對小鼠小腸隱窩細胞p53表達的影響 小腸隱窩p53 染色結(jié)果顯示, 照射組每個隱窩p53陽性細胞數(shù)量（9.74 ± 1.27）比對照組（1.36 ± 0.15）有顯著升高 (P<0.001)。

圖 全身照射小鼠小腸隱窩細胞凋亡及caspase3、p-p38、p53、Ki67免疫組化染色

1. 實驗動物 SPF級C57BL/6 雄性小鼠由中國醫(yī)學科學院動物研究所提供。

2. 照射條件: 137Cs γ 射線輻射源購自加拿大原子能有限公司 (劑量率為0.76 Gy?min?1), 小鼠接受全身一次性照射, 劑量為7.2Gy。

3. 觀察30天生存率 每日觀察小鼠一般狀況，稱重；4. 實驗取材 照射 24 h 后頸椎脫臼處死小鼠, 取小腸組織, 依次用預(yù)冷PBS、10%中性福爾馬林沖洗內(nèi)容物。然后將小腸切成小段, 用醫(yī)用透氣膠帶成捆包扎, 固定, 24 h 后脫水并制作石蠟塊。5.HE 染色和免疫組化實驗小腸組織HE 染色采用傳統(tǒng)實驗方法。鏡下通過形態(tài)學變化計數(shù)小腸隱窩內(nèi)凋亡細胞數(shù)量。小腸組織內(nèi)幾種蛋白表達檢測參考試劑說明書采用免疫組化兩步法檢測。主要步驟: 脫蠟, 0.1 mol?L?1檸檬酸鹽95 ℃修復30 min, 10%過氧化氫室溫孵育10 min, 第一抗體4 ℃孵育過夜,第二抗體37 ℃孵育30 min, DAB 顯色, 蘇木素復染, 脫水封片。然后盲法鏡下計數(shù)每只小鼠50 個完整小腸隱窩陽性細胞數(shù)。完整隱窩標準: 切面在隱窩中心,可見清晰、完整的隱窩腔, 隱窩底部有4～6 個分泌細胞, 分泌細胞至隱窩頂部每側(cè)至少有10 個隱窩上皮細胞。6. 數(shù)據(jù)處理 生存率用百分數(shù)表示, 兩組間比較采用卡方檢驗。其他數(shù)據(jù)以x ± s 表示, 組間比較采用t 檢驗。

一、疾病概述

急性放射病(acute radiation disease)是機體在短時間內(nèi)受到大劑量(>1Gy)電離輻射照射引起的全身性疾病。外照射和內(nèi)照射都可能發(fā)生急性放射病，但以外照射為主。外照射引起急性放射病的射線有γ線、中子和X射線等。

1. 病因

1）核輻射事故：核電站核事故或者輻射源管理不當導致的輻射源事故。

2）醫(yī)療事故：放射性核素和輻射裝置的醫(yī)療應(yīng)用，也有可能發(fā)生醫(yī)療事故。

3）治療性照射：因治療需要而給予病人大劑量照射，可造成治療性急性放射病。如骨髓移植前常用大劑量(>6Gy)全身照射或全身淋巴結(jié)照射，作為骨髓移植前的預(yù)處理。

2.分型和分度 根據(jù)照射劑量大小、病理和臨床過程的特點，急性放射病分為三型，即骨髓型、腸型和腦型。

3.癥狀和體征 急性放射病的癥狀有：疲勞、頭昏、失眠、皮膚發(fā)紅、潰瘍、出血、脫發(fā)、白血病、嘔吐、腹瀉等。有時還會增加癌癥、畸變、遺傳性病變發(fā)生率，影響幾代人的健康。一般講，身體接受的輻射能量越多，其放射病癥狀越嚴重，致癌、致畸風險越大。

腸型急性放射病，是以胃腸道損傷為基本病變，以頻繁嘔吐、嚴重腹瀉以及水電解質(zhì)代謝紊亂為主要臨床表現(xiàn)，具有初期、假緩期和極期三階段病程的嚴重的急性放射病。

4.診斷 急性放射病的診斷主要依據(jù)：受照射史；主要臨床表現(xiàn)；實驗室檢查；排除具有相似臨床表現(xiàn)的其他疾病。

5.腸型急性放射病的治療原則 根據(jù)病情程度，采取積極綜合對癥的支持治療，特別注意早期的妥善處理。對輕度腸型放射病病人盡早無菌隔離，糾正水、電解質(zhì)、酸堿失衡，改善微循環(huán)障礙，調(diào)節(jié)植物神經(jīng)系統(tǒng)功能，積極抗感染、抗出血，有條件時及時進行骨髓移植。對于重度腸型放射病病人應(yīng)用對癥治療措施減輕病人痛苫，延長生命。

二、模型背景

1. 實驗動物背景信息

C57BL/6J小鼠。

2. 研究背景

腸型急性放射病在臨床上屬于危癥、重癥。死亡率很高。目前沒有確切有效的治療藥物。建立可靠的動物模型對闡明輻射誘導的腸損傷的病理生理變化機制，研究生物學標志物，研發(fā)防治措施具有重要的作用。其中小鼠、大鼠、犬有明顯的腸型放射病的表現(xiàn)，另外也有用貓、兔、小型豬、猴制作輻射腸損傷模型。但是以小鼠模型應(yīng)用最多。

小腸上皮細胞增殖更新很快，對輻射損傷非常敏感。較低劑量1Gy暴露3-6h就會引起小腸隱窩細胞凋亡細胞增多。隨著劑量的增加上皮損傷逐漸加重。不同品系的小鼠有一定的差異。C57小鼠小腸細胞對輻射也比較敏感。腸型放射病多在受到大劑量照射后1周內(nèi)死亡。這個模型對研究腸道輻射損傷機制，研發(fā)相關(guān)救治藥物具有重要的意義。

參考文獻:

1. 1. Singh VK, Newman VL, Berg AN, MacVittie TJ. Animal models for acute radiation syndrome drug discovery. Expert Opin Drug Discov. 2015 May;10(5):497-517.2. Singh VK, Santiago PT, MacVittie TJ. Opportunities and challenges with animal models for acute radiation syndrome drug discovery. Expert Opin Drug Discov. 2018 Nov;13(11):987-992.3. Potten CS, Grant HK. The relationship between ionizing radiation-induced apoptosis and stem cells in the small and large intestine Br J Cancer. 1998 Oct;78(8):993-1003.

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